Stat3 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-423176-ACT

Der Signaltransducer und Aktivator der Transkription 3 (Stat3) ist ein zentraler Transkriptionsfaktor in Mauszellen, der Signale von Zytokin- und Wachstumsfaktorrezeptoren in den Zellkern weiterleitet – besonders ausgeprägt stromabwärts von JAK-Kinasen nach Signalen der IL-6-Familie. Nach Aktivierung reguliert Stat3 Genprogramme, die Proliferation, Überleben, Differenzierung und Entzündungsantworten steuern, und integriert dabei Crosstalk mit MAPK- sowie PI3K–AKT-Signalwegen. Die Stat3-Aktivität beeinflusst die Polarisierung von Immunzellen und die Gewebehomöostase, und eine fehlregulierte STAT3-Signalübertragung wird umfassend im Kontext von Entzündung, Fibrose, metabolischem Stress und onkogenen transkriptionellen Netzwerken untersucht. Im Nervensystem sowie in Stamm-/Vorläuferzellkontexten trägt Stat3 außerdem zu Linienentscheidungen und stressresponsiver Transkription bei.

Stat3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Stat3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Stat3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Stat3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Stat3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Stat3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Stat3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Stat3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Stat3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Stat3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.