Plásmido CRISPR de Activación (h) Stat3: sc-400027-ACT

El STAT3 humano codifica Stat3, un factor de transcripción citoplasmático latente que se activa aguas abajo de receptores de citocinas y factores de crecimiento mediante la señalización JAK/STAT. Tras su fosforilación, Stat3 dimeriza y se transloca al núcleo para regular programas génicos que controlan la proliferación, la supervivencia, la diferenciación, la inflamación y la función de las células inmunitarias, con una amplia interconexión con las vías MAPK y PI3K–AKT. La actividad de STAT3 modula las respuestas de fase aguda e influye en la transición epitelio–mesénquima, la señalización angiogénica y la adaptación metabólica en diversos tipos celulares. La señalización de STAT3 desregulada se asocia con fenotipos inflamatorios y autoinmunes y se estudia con frecuencia en contextos de reprogramación transcripcional oncogénica y señalización del microambiente tumoral.

Stat3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de STAT3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Stat3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus STAT3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional STAT3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Stat3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo STAT3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Stat3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Stat3 en células tumorales con expresión de STAT3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.