Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
StAR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400961
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- StAR El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico StAR, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: StAR Anticuerpo (D-2): sc-166821
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
StAR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400961 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
STAR codifica la proteína reguladora aguda de la esteroidogénesis (StAR), un factor asociado a la membrana mitocondrial que media el paso limitante en la velocidad: la transferencia de colesterol desde la membrana mitocondrial externa a la interna para iniciar la biosíntesis de hormonas esteroideas. Este proceso sostiene la producción de pregnenolona por CYP11A1 y se integra con la señalización cAMP/PKA, la dinámica mitocondrial y el tráfico de lípidos en células esteroidogénicas suprarrenales y gonadales. La alteración del transporte de colesterol dependiente de StAR perturba la esteroidogénesis y modifica programas transcripcionales regulados por el sistema endocrino y respuestas celulares al estrés. Las variantes o la pérdida de función de STAR se asocian con fenotipos de insuficiencia esteroidogénica suprarrenal congénita, lo que convierte a StAR en una diana clave para estudios mecanísticos sobre el manejo mitocondrial del colesterol y el control de las vías esteroidogénicas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO StAR (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen STAR en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del STAR junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de STAR tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína StAR.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en STAR para la investigación de la señalización de StAR, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de STAR críticos para la función de StAR
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de STAR para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido StAR CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido StAR CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus STAR. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR StAR (h) y el plásmido HDR StAR (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología STAR para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana STAR definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.