Plásmido CRISPR de Activación (m) STAMP2: sc-431182-ACT

El gen *Steap4* de ratón codifica STAMP2, una metalorreductasa de seis dominios transmembrana que contribuye al control redox celular al facilitar la reducción de hierro férrico y cobre cúprico y al coordinar la señalización dependiente de metales. STAMP2 es inducida por señales inflamatorias y metabólicas, y se ha vinculado a vías que regulan la función de los adipocitos, la respuesta a la insulina y las respuestas de estrés impulsadas por citocinas. En tejidos inmunitarios y metabólicos, STAMP2 influye en el equilibrio de las especies reactivas de oxígeno y en la homeostasis del retículo endoplásmico, procesos que moldean la activación de macrófagos y la remodelación del tejido adiposo. La desregulación de la expresión de *Steap4* se ha asociado con estados inflamatorios y disfunción metabólica, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar el diálogo inmunometabólico en modelos murinos.

STAMP2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Steap4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

STAMP2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Steap4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Steap4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de STAMP2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Steap4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de STAMP2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía STAMP2 en células tumorales con expresión de Steap4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.