Plasmide CRISPR/Cas9 KO St3Gal-I (m): sc-422935

Présentation

Le gène murin St3gal1 code la sialyltransférase St3Gal-I, résidente de l’appareil de Golgi, qui catalyse l’ajout d’acide sialique lié en α2,3 aux structures Galβ1-3GalNAc afin de générer des O‑glycanes « core 1 » sialylés. En modulant l’état de sialylation des O‑glycoprotéines de type mucine, St3Gal-I influence la stabilité des protéines médiée par les glycannes, l’engagement des récepteurs et les interactions cellule–cellule ou cellule–matrice. Cette activité contribue à des processus plus larges dépendants de la glycosylation, tels que la reconnaissance immunitaire, le trafic leucocytaire et la modulation de la signalisation à la surface cellulaire. Des altérations de l’activité de ST3GAL1 et des profils de sialylation des O‑glycanes core 1 ont été associées à l’inflammation et au remodelage glycannique lié aux tumeurs, faisant de St3gal1 une cible utile pour des études mécanistiques des changements de glycosylation pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO St3Gal-I (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène St3gal1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du St3gal1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert St3gal1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine St3Gal-I.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en St3gal1 pour l'étude de la signalisation de St3Gal-I, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de St3gal1 essentiels à la fonction de St3Gal-I
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de St3gal1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le St3Gal-I plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le St3Gal-I plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus St3gal1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le St3Gal-I plasmide HDR (m) et le St3Gal-I (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie St3gal1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles St3gal1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.