ST2 Double Nickase Plasmid (h): sc-402390-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ST2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ST2 Double-Nickase-Plasmid (h) und ST2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf IL1RL1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ST2: sc-74296
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ST2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402390-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ST2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402390-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes IL1RL1 kodiert ST2, ein Mitglied der Interleukin‑1‑Rezeptorfamilie, das als kognater Rezeptor für IL‑33 dient und die angeborene sowie adaptive Immunsignalgebung moduliert. ST2 liegt in membrangebundenen und löslichen Isoformen vor, die IL‑33‑abhängige Signalwege prägen, darunter die MyD88‑abhängige Aktivierung von NF‑κB‑ und MAPK‑Signalwegen, und damit die Zytokinproduktion, Gewebeumbauprozesse und Entzündungen an Barrieren beeinflussen. Die Aktivität von IL1RL1/ST2 ist eng mit Typ‑2‑Immunantworten in epithelialen und stromalen Kompartimenten verknüpft und wird häufig im Kontext allergischer Entzündung und asthmaassoziierter Signalnetzwerke untersucht. Eine fehlregulierte Funktion der IL‑33–ST2‑Achse wird zudem bei kardiovaskulären und fibrotischen Prozessen untersucht, bei denen ein Immun‑Stroma‑Crosstalk zu chronischer Entzündung beiträgt.
ST2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IL1RL1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IL1RL1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IL1RL1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IL1RL1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.