Plasmide CRISPR d'Activation (h) SSX7: sc-403553-ACT

SSX7 (synovial sarcoma, X breakpoint 7) code une protéine de type antigène cancer‑testis appartenant à la famille SSX, caractérisée par une expression normale restreinte et par des rôles dans la régulation transcriptionnelle. SSX7 serait impliqué dans des processus associés à la chromatine et dans la modulation de programmes d’expression génique qui influencent l’identité cellulaire et la prolifération. Une expression dérégulée des membres de la famille SSX a été associée à des états transcriptionnels liés aux tumeurs et à la présentation d’antigènes immunogènes, ce qui soutient son intérêt comme marqueur moléculaire en biologie du cancer. L’étude de SSX7 aide à élucider les mécanismes de contrôle épigénétique, l’équilibre entre répression et activation transcriptionnelles, ainsi que le remodelage des voies en aval dans les cellules transformées.

SSX7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SSX7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SSX7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SSX7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SSX7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SSX7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SSX7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SSX7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SSX7 dans les cellules tumorales présentant une expression de SSX7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.