Plasmide CRISPR d'Activation (h) SSX5: sc-403552-ACT

SSX5 (synovial sarcoma, point de cassure X 5) code une protéine nucléaire de type antigène cancer-testis, impliquée dans la régulation transcriptionnelle et dans des processus associés à la chromatine. Les membres de la famille SSX peuvent interagir avec des régulateurs épigénétiques, notamment les complexes du groupe Polycomb, influençant des programmes d’expression génique liés à l’identité cellulaire et au contrôle de la prolifération. Une expression aberrante de SSX5 a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux et est fréquemment étudiée dans le cadre d’oncogènes de fusion associés aux SSX ainsi que de la biologie des antigènes en immuno-oncologie. Par conséquent, SSX5 est utilisé comme modèle pour étudier la dérégulation transcriptionnelle, l’expression d’antigènes à restriction de lignée et les réseaux régulateurs associés aux tumeurs.

SSX5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SSX5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SSX5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SSX5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SSX5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SSX5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SSX5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SSX5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SSX5 dans les cellules tumorales présentant une expression de SSX5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.