Partículas Lentivirales de Activación (h) SSc5D: sc-418823-LAC

SSC5D codifica la proteína 5D que contiene dominios ricos en cisteína del receptor depurador (SSc5D), una proteína inmunomoduladora asociada a la membrana y secretada, enriquecida en linajes mieloides. SSc5D participa en el reconocimiento inmunitario innato y en las interacciones huésped–microbio mediante la unión a ligandos microbianos y la regulación de la señalización inflamatoria, apoyando procesos como la activación de leucocitos, las respuestas de citocinas y la función de las células presentadoras de antígeno. Su patrón de expresión vincula a SSC5D con programas de diferenciación de células inmunitarias y con estados inflamatorios tisulares, lo que lo hace relevante para estudios de biología de la infección y de activación inmunitaria desregulada. La actividad alterada de SSC5D se ha asociado con contextos de enfermedades inflamatorias y relacionadas con el sistema inmunitario, lo que respalda su utilidad como un nodo mecanístico para el interrogatorio de vías inmunitarias.

Las partículas de activación lentiviral SSc5D (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SSC5D en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral SSc5D (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SSC5D, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de SSc5D. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SSC5D y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.