Plásmido CRISPR de Activación (h) SSc5D: sc-418823-ACT

SSC5D codifica el miembro humano de la familia de receptores “scavenger” ricos en cisteína con múltiples dominios SRCR (SSc5D), una proteína de reconocimiento de patrones e interacción celular implicada en la vigilancia inmunitaria innata. SSc5D se ha asociado con la modulación de la señalización inflamatoria y la regulación de los estados de activación de los leucocitos, lo que la vincula con vías que gobiernan las interacciones huésped–microbio y la homeostasis inmunitaria tisular. Los patrones de expresión en contextos de linaje mieloide y asociados al sistema inmunitario hacen que SSC5D sea relevante para estudiar mecanismos que determinan la función de las células presentadoras de antígeno, las respuestas de citocinas y el tráfico de células inmunitarias. Se ha informado de una expresión desregulada de SSC5D en escenarios de enfermedades inflamatorias y relacionadas con el sistema inmunitario, lo que respalda su uso como punto de entrada molecular para investigar fenotipos inmunitarios asociados a la enfermedad.

SSc5D El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SSC5D sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SSc5D El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SSC5D en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SSC5D, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SSc5D. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SSC5D y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SSc5D en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SSc5D en células tumorales con expresión de SSC5D silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.