SRY Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404342

Panoramica

SRY codifica il fattore di trascrizione della regione determinante il sesso del cromosoma Y, una proteina legante il DNA con dominio HMG-box che avvia la determinazione del sesso maschile indirizzando la differenziazione gonadica precoce verso lo sviluppo del testicolo. Regolando programmi trascrizionali nella gonade bipotente, SRY attiva vie a valle, inclusa l’attivazione di SOX9 e di reti geniche più ampie che coordinano l’impegno di linea delle cellule del Sertoli e la soppressione dei segnali che promuovono lo sviluppo ovarico. L’alterazione o la disregolazione della funzione di SRY è associata a disordini dello sviluppo sessuale, tra cui la disgenesia gonadica 46,XY e fenotipi di inversione del sesso, rendendolo un bersaglio chiave per lo studio del controllo trascrizionale delle decisioni di destino nello sviluppo. Nei modelli cellulari, SRY rappresenta un nodo gestibile per indagare la regolazione genica dipendente dalla cromatina e l’attività dei fattori di trascrizione che specificano la linea cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SRY (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SRY in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SRY insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SRY a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SRY.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SRY per lo studio della segnalazione di SRY, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SRY critici per la funzione di SRY
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SRY per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SRY CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SRY CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SRY. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SRY Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SRY (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SRY per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SRY definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.