Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
SRY Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404342
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- SRY El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico SRY, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SRY Anticuerpo (SRY-15): sc-69842
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
SRY Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404342 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
SRY codifica el factor de transcripción de la región determinante del sexo del cromosoma Y, una proteína de unión al ADN con dominio HMG-box que inicia la determinación sexual masculina al dirigir la diferenciación gonadal temprana hacia el desarrollo de los testículos. Al regular programas transcripcionales en la gónada bipotencial, SRY impulsa vías posteriores, incluida la activación de SOX9 y redes génicas más amplias que coordinan el compromiso con el linaje de células de Sertoli y la supresión de señales promotoras del desarrollo ovárico. La alteración o desregulación de la función de SRY se asocia con trastornos del desarrollo sexual, incluida la disgenesia gonadal 46,XY y fenotipos de reversión sexual, lo que lo convierte en un objetivo clave para estudiar el control transcripcional de las decisiones del destino del desarrollo. En modelos celulares, SRY sirve como un nodo manejable para investigar la regulación génica dependiente de la cromatina y la actividad de factores de transcripción que especifican linajes.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO SRY (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SRY en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SRY junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SRY tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SRY.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SRY para la investigación de la señalización de SRY, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de SRY críticos para la función de SRY
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SRY para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido SRY CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SRY CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SRY. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SRY (h) y el plásmido HDR SRY (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SRY para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SRY definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.