SRY CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404342

概要

SRYは、性決定領域Y（sex-determining region Y）転写因子をコードしており、HMGボックスをもつDNA結合タンパク質です。SRYは、初期の性腺分化を精巣形成の方向へ誘導することで、雄性の性決定を開始します。両方向性（bipotential）の性腺における転写プログラムを制御することで、SRYはSOX9の活性化を含む下流経路を駆動し、セルトリ細胞系譜へのコミットメントを調整するとともに、卵巣形成を促進するシグナルを抑制するより広範な遺伝子ネットワークを制御します。SRY機能の破綻や調節異常は、46,XY性腺形成不全や性逆転表現型などの性分化疾患（DSD）と関連しており、発生運命決定における転写制御を研究するうえで重要な標的となっています。細胞モデルにおいては、SRYはクロマチン依存的な遺伝子制御や、系譜を規定する転写因子活性を解析するための扱いやすい結節点として利用されます。

SRY CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSRY遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SRY内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SRYのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SRYタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SRYシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SRY欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SRYの機能に不可欠なSRYエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SRYゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SRY CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSRY CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SRY遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SRY HDRプラスミド（h）および SRY HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSRYホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSRY標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。