Plasmide CRISPR d'Activation (h) SRp55: sc-401621-ACT

SRSF6 code le facteur d’épissage humain riche en sérine/arginine SRp55, une protéine liant l’ARN qui couple la sélection des sites d’épissage au traitement co‑transcriptionnel de l’ARN et à l’export de l’ARNm. SRp55 participe à l’assemblage du spliceosome et régule des choix d’épissage alternatif qui façonnent des programmes d’expression d’isoformes contrôlant la prolifération, la différenciation et les réponses au stress. En modulant l’inclusion des exons et l’architecture exon–intron, SRSF6 influence des voies en aval, notamment la progression du cycle cellulaire, l’apoptose et des réseaux de transduction du signal sensibles à l’équilibre des isoformes de transcrits. Une expression ou une activité dérégulée de SRSF6 a été associée dans la littérature à des profils d’épissage aberrants observés dans de multiples contextes pathologiques, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique pour l’étude de phénotypes induits par l’épissage dans les cellules humaines.

SRp55 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SRSF6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SRp55 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SRSF6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SRSF6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SRp55. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SRSF6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SRp55 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SRp55 dans les cellules tumorales présentant une expression de SRSF6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.