Plasmide CRISPR d'Activation (h) SRp40: sc-401886-ACT

Le gène humain **SRSF5** code le facteur d’épissage **SRp40**, une protéine de liaison à l’ARN riche en sérine/arginine qui régule l’épissage constitutif et alternatif des pré-ARNm et influence la définition des exons via des interactions avec des activateurs exoniques de l’épissage (ESE). SRp40 contribue à des réseaux de maturation de l’ARN qui couplent l’épissage à la transcription et à l’export des ARNm, orientant le choix des isoformes dans des voies contrôlant la progression du cycle cellulaire, l’apoptose et les réponses au stress. Une activité ou une expression altérée de SRSF5 peut déplacer l’équilibre entre isoformes d’épissage et a été associée à une dérégulation du métabolisme de l’ARN observée dans de multiples contextes pathologiques, notamment des voies de signalisation liées au cancer et des phénotypes prolifératifs. En tant que nœud de la régulation du spliceosome médiée par les protéines SR, SRp40 est fréquemment étudiée pour son impact sur le remodelage du transcriptome et la diversité du protéome.

SRp40 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SRSF5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SRp40 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SRSF5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SRSF5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SRp40. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SRSF5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SRp40 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SRp40 dans les cellules tumorales présentant une expression de SRSF5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.