Plasmide CRISPR d'Activation (h) SRGAP1: sc-403408-ACT

SRGAP1 (SLIT-ROBO Rho GTPase-activating protein 1) code une RhoGAP multidomaine qui relie les signaux de guidage SLIT/ROBO au remodelage du cytosquelette d’actine. En modulant les GTPases de la famille Rho et en coordonnant la dynamique membranaire, SRGAP1 influence la croissance des neurites, la migration neuronale et la morphologie associée aux synapses, et participe à des processus tels que l’adhésion cellulaire et la motilité dirigée. Ces fonctions situent SRGAP1 au sein de réseaux de signalisation qui régulent l’organisation du cytosquelette et la mise en place des patrons développementaux, avec une pertinence pour les phénotypes neurodéveloppementaux et les perturbations du mouvement cellulaire dans des modèles de maladie.

SRGAP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SRGAP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SRGAP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SRGAP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SRGAP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SRGAP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SRGAP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SRGAP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SRGAP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SRGAP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.