Plasmide CRISPR d'Activation (h) SREBP-2: sc-400575-ACT

SREBF2 code la protéine 2 se liant aux éléments de réponse aux stérols (SREBP‑2), un facteur de transcription ancré à la membrane qui est activé par protéolyse en conditions de faible teneur en stérols afin d’induire l’expression de gènes contrôlant la biosynthèse et l’absorption du cholestérol. En association avec les protéines SCAP et INSIG, SREBP‑2 régule la voie du mévalonate et l’importation de cholestérol médiée par le récepteur des LDL, en coordonnant l’homéostasie lipidique avec le stress du réticulum endoplasmique (RE) et des signaux métaboliques. Une activité altérée de SREBF2/SREBP‑2 a été impliquée dans la dyslipidémie et des phénotypes liés au syndrome métabolique, et a également été associée à un remodelage lipidique favorisant la prolifération et la signalisation inflammatoire dans des contextes pathologiques. En tant que nœud central de la détection des stérols et du contrôle transcriptionnel, SREBF2 est largement étudié pour son rôle dans la régulation du métabolisme, la composition membranaire et les interactions avec l’autophagie et les voies de l’immunité innée.

SREBP-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SREBF2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SREBP-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SREBF2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SREBF2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SREBP-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SREBF2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SREBP-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SREBP-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SREBF2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.