Plasmide CRISPR d'Activation (h) SREBP-1: sc-400094-ACT

SREBF1 code la protéine 1 de liaison aux éléments régulateurs des stérols (SREBP‑1), un facteur de transcription ancré à la membrane qui est activé par protéolyse afin de contrôler l’homéostasie des lipides et du cholestérol. La forme active de SREBP‑1 coordonne l’expression de gènes impliqués dans la lipogenèse de novo et la désaturation des acides gras, en intégrant les signaux nutritionnels et de l’insuline avec le trafic du RE vers le Golgi et les réponses au stress du RE. Cette voie module la biogenèse membranaire et le stockage énergétique, et elle est fréquemment remaniée dans les troubles métaboliques et l’inflammation induite par les lipides. Une activité altérée de SREBF1/SREBP‑1 a également été associée à une reprogrammation métabolique oncogénique et à des changements des programmes de différenciation cellulaire.

SREBP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SREBF1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SREBP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SREBF1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SREBF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SREBP-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SREBF1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SREBP-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SREBP-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SREBF1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.