Plásmido Doble Nickase (h) SR-3A: sc-402999-NIC

HTR3A codifica el receptor humano 3A de 5-hidroxitriptamina (serotonina) (SR-3A), un canal iónico activado por ligando de la familia de receptores Cys-loop que forma receptores 5-HT3 homopentaméricos o heteropentaméricos junto con otras subunidades. Tras la unión de la serotonina, SR-3A media una rápida entrada de cationes para regular la despolarización de la membrana, la señalización dependiente de calcio y la liberación de neurotransmisores, conectando el tono serotoninérgico con la transmisión sináptica y la comunicación neuroinmunitaria. La actividad de HTR3A se cruza con vías que controlan la excitabilidad neuronal y, mediante cambios en la homeostasis iónica, con programas transcripcionales dependientes de MAPK/ERK y sensibles al AMPc. La señalización 5-HT3 desregulada se ha asociado con fenotipos neuropsiquiátricos y gastrointestinales, lo que respalda investigar HTR3A en la biología del eje intestino–cerebro y en las respuestas celulares evocadas por estímulos.

SR-3A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HTR3A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HTR3A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HTR3A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HTR3A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.