SR-2C Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400886

Descripción general

HTR2C codifica el receptor humano de serotonina 2C (SR-2C), un receptor acoplado a proteína G que se acopla principalmente a Gq/11 para estimular la señalización de la fosfolipasa C, la producción de inositol trifosfato, la movilización de Ca2+ intracelular y la activación de la proteína quinasa C. SR-2C también activa las vías MAPK/ERK y modula la excitabilidad neuronal y la transmisión sináptica mediante efectos sobre la actividad de canales iónicos y la dinámica de segundos mensajeros. En el sistema nervioso central, HTR2C contribuye a la regulación del apetito, el estado de ánimo, la respuesta al estrés y las salidas endocrinas, integrando señales serotoninérgicas con programas transcripcionales y metabólicos aguas abajo. La desregulación de la señalización de 5-HT2C y la edición de ARN/variación de empalme en HTR2C se ha asociado en la literatura de investigación con fenotipos neuropsiquiátricos y metabólicos, lo que respalda su utilidad como diana mecanística para estudios de vías y de relación genotipo–fenotipo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SR-2C (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HTR2C en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HTR2C junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HTR2C tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SR-2C.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HTR2C para la investigación de la señalización de SR-2C, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de HTR2C críticos para la función de SR-2C
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HTR2C para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SR-2C CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SR-2C CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HTR2C. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SR-2C (h) y el plásmido HDR SR-2C (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HTR2C para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HTR2C definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.