Squalene synthetase Double Nickase Plasmid (h): sc-403845-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Squalene synthetase Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Squalene synthetase Double-Nickase-Plasmid (h) und Squalene synthetase Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FDFT1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Squalene synthetase: sc-271602
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Squalene synthetase Double Nickase Plasmid (h) | sc-403845-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Squalene synthetase Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403845-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FDFT1 kodiert die Squalensynthase, ein mit dem endoplasmatischen Retikulum assoziiertes Enzym, das den ersten festgelegten Schritt der Sterolbiosynthese katalysiert, indem es zwei Moleküle Farnesyldiphosphat zu Squalen umsetzt. Diese Reaktion verknüpft den Mevalonatweg mit der nachgeschalteten Cholesterinproduktion und koordiniert damit Membranbiogenese, die Organisation von Lipid-Rafts sowie die Synthese steroidabgeleiteter Metaboliten. Durch die Steuerung des Stoffflusses in die Sterolsynthese beeinflusst die Squalensynthase die zelluläre Lipidhomöostase und die Rückkopplungsregulation cholesterinresponsiver Transkriptionsprogramme. Eine Fehlregulation des FDFT1-abhängigen Sterolstoffwechsels wurde in Zusammenhängen der Stoffwechsel- und Herz-Kreislauf-Biologie, der Neurobiologie sowie in proliferativen Zuständen untersucht, in denen die Aktivität des Mevalonatwegs verändert ist.
Squalene synthetase Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FDFT1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FDFT1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FDFT1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FDFT1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.