Plasmide Double Nickase (h) Squalene synthetase: sc-403845-NIC

FDFT1 code la squalène synthase, une enzyme associée au réticulum endoplasmique qui catalyse la première étape spécifiquement engagée de la biosynthèse des stérols en convertissant deux molécules de diphosphate de farnésyle en squalène. Cette réaction relie la voie du mévalonate à la production en aval de cholestérol, coordonnant la biogenèse membranaire, l’organisation des radeaux lipidiques et la synthèse de métabolites dérivés des stéroïdes. En contrôlant le flux entrant dans la synthèse des stérols, la squalène synthase influence l’homéostasie lipidique cellulaire et la régulation par rétroaction des programmes transcriptionnels sensibles au cholestérol. La dérégulation du métabolisme des stérols dépendant de FDFT1 a été étudiée dans des contextes de biologie métabolique et cardiovasculaire, de neurobiologie, ainsi que d’états prolifératifs où l’activité de la voie du mévalonate est modifiée.

Squalene synthetase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FDFT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FDFT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FDFT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FDFT1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.