Plásmido CRISPR de Activación (h) SPTLC2: sc-403913-ACT

SPTLC2 codifica una subunidad catalítica de la serina palmitoiltransferasa, la enzima limitante de la velocidad que inicia la biosíntesis de novo de esfingolípidos al condensar serina con palmitoil‑CoA. Al controlar la producción de ceramida y de esfingolípidos complejos, SPTLC2 influye en la composición de las membranas, la organización de las balsas lipídicas y procesos de señalización vinculados con la apoptosis, la autofagia y las respuestas celulares al estrés. Las alteraciones en la actividad de SPTLC2 pueden desestabilizar la homeostasis de los esfingolípidos y se han asociado con fenotipos metabólicos y neurodegenerativos, así como con mecanismos relevantes para la señalización inflamatoria. Dado que los esfingolípidos modulan la función de los orgánulos y el tráfico vesicular, SPTLC2 se estudia ampliamente en el metabolismo lipídico del retículo endoplásmico, el diálogo cruzado del estrés mitocondrial y la regulación del destino celular.

SPTLC2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SPTLC2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SPTLC2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SPTLC2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SPTLC2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SPTLC2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SPTLC2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SPTLC2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SPTLC2 en células tumorales con expresión de SPTLC2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.