Plasmide CRISPR d'Activation (h) SPRR2G: sc-416907-ACT

SPRR2G (small proline-rich protein 2G) est un précurseur de l’enveloppe cornée exprimé principalement dans les épithéliums stratifiés, où il contribue à la formation de la barrière en servant de substrat au pontage médié par les transglutaminases lors de la différenciation terminale des kératinocytes. Il s’inscrit dans des programmes de différenciation épidermique et de kératinisation coordonnés avec le remodelage du cytosquelette et des réseaux de gènes épithéliaux sensibles au stress. Une expression altérée des membres de la famille SPRR est fréquemment observée dans des affections cutanées inflammatoires associées à une altération de la barrière et dans l’hyperprolifération épithéliale, et SPRR2G a été utilisé comme indicateur moléculaire de l’état de différenciation et du remodelage tissulaire. Ces caractéristiques font de SPRR2G une cible pertinente pour l’étude de l’homéostasie épithéliale, des réponses aux lésions et des modifications de la différenciation associées aux maladies.

SPRR2G Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SPRR2G sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SPRR2G Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SPRR2G dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SPRR2G, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SPRR2G. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SPRR2G natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SPRR2G au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SPRR2G dans les cellules tumorales présentant une expression de SPRR2G silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.