Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sprouty 2: sc-401087-ACT

SPRY2 code la protéine Sprouty 2, un inhibiteur de rétrocontrôle conservé de la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase (RTK), qui module des effets induits par les facteurs de croissance tels que la prolifération, la différenciation et la migration. Sprouty 2 atténue principalement la signalisation RAS–RAF–MEK–ERK/MAPK en aval de FGFR, d’EGFR et d’autres RTK en influençant les interactions entre adaptateurs et effecteurs, ce qui façonne l’intensité et la durée du signal. Grâce à ces fonctions, SPRY2 contribue à la régulation des programmes de développement, des dynamiques épithélio-mésenchymateuses et des réponses au stress cellulaire. Une expression ou une régulation altérée de SPRY2 a été associée à une activité dérégulée de la voie MAPK observée dans plusieurs contextes pertinents pour la maladie, notamment des réseaux de signalisation oncogénique et un remodelage tissulaire aberrant.

Sprouty 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SPRY2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sprouty 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SPRY2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SPRY2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sprouty 2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SPRY2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sprouty 2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sprouty 2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SPRY2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.