Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sprouty 1: sc-401299-ACT

SPRY1 code pour Sprouty 1, un inhibiteur intracellulaire de la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase, qui assure une rétroaction négative en aval du FGF et d’autres signaux de facteurs de croissance. En atténuant l’activité de la voie RAS–RAF–MEK–ERK/MAPK, Sprouty 1 contribue à réguler la prolifération, la migration et la différenciation cellulaires au cours du développement et du maintien de l’homéostasie tissulaire. Une expression altérée de SPRY1 ou un déséquilibre de la signalisation ont été associés à des réponses dérégulées aux facteurs de croissance observées dans des contextes oncogéniques ainsi que dans des modèles de biologie vasculaire, rénale et du développement. En tant que modulateur de voie, Sprouty 1 est fréquemment étudié pour son rôle dans le contrôle de l’amplitude et de la durée du signal au sein de programmes transcriptionnels dépendants de MAPK.

Sprouty 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SPRY1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sprouty 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SPRY1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SPRY1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sprouty 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SPRY1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sprouty 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sprouty 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SPRY1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.