Plasmide CRISPR/Cas9 KO SPRN (h): sc-407259

Présentation

SPRN code pour la protéine prion « shadow » (Shadoo), une protéine membranaire ancrée par un glycosylphosphatidylinositol (GPI), enrichie dans le système nerveux et impliquée dans la biologie liée aux prions. Shadoo partage des caractéristiques structurales et fonctionnelles avec les protéines de la famille PRNP et est associée à des processus tels que le contrôle qualité des protéines, l’organisation des microdomaines membranaires et les réponses cellulaires au stress. Une expression altérée de SPRN a été reliée, dans des modèles expérimentaux, à la susceptibilité aux maladies à prions et à des phénotypes neurodégénératifs, ce qui étaye sa pertinence pour les voies qui régissent la protéostasie et la viabilité neuronale. L’étude de SPRN contribue à préciser comment des réseaux de protéines de type prion influencent le maintien synaptique et les réponses au stress induit par des protéines mal repliées.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SPRN (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SPRN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SPRN, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SPRN à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SPRN.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SPRN pour l'étude de la signalisation de SPRN, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SPRN essentiels à la fonction de SPRN
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SPRN pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SPRN plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SPRN plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SPRN. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SPRN plasmide HDR (h) et le SPRN (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SPRN pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SPRN définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.