Plasmide Double Nickase (h) SPRED2: sc-404738-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) SPRED2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SPRED2 Double Nickase (h) et le plasmide SPRED2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SPRED2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: SPRED2 Antibody (6G8): sc-517018
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) SPRED2 | sc-404738-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) SPRED2 | sc-404738-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SPRED2 (Sprouty related EVH1 domain containing 2) est une protéine adaptatrice cytosolique qui agit comme régulateur négatif de la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase en limitant l’activation de la voie RAF/MEK/ERK (MAPK). En interagissant avec des composants tels que RAF et en modulant les complexes de signalisation dépendants de RAS, SPRED2 contribue au contrôle de la prolifération, de la différenciation et des réponses inflammatoires induites par les facteurs de croissance. Une expression ou une fonction altérée de SPRED2 a été associée à des programmes de signalisation MAPK dérégulés impliqués dans la biologie des cancers et dans des processus immuno‑médiés, ce qui appuie son intérêt en tant que nœud pour l’étude de l’atténuation du signal et du contrôle par rétroaction. Dans les cellules humaines, la perturbation de SPRED2 constitue une approche pratique pour analyser les interactions entre la signalisation MAPK et les sorties transcriptionnelles et cytosquelettiques en aval.
SPRED2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SPRED2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SPRED2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SPRED2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SPRED2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.