Plásmido Doble Nickase (h) SPRED2: sc-404738-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)SPRED2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa SPRED2 (h) y el plásmido de doble nickasa SPRED2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a SPRED2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SPRED2 Anticuerpo (6G8): sc-517018
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) SPRED2 | sc-404738-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) SPRED2 | sc-404738-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SPRED2 (Sprouty related EVH1 domain containing 2) es una proteína adaptadora citosólica que actúa como regulador negativo de la señalización de las tirosina quinasas receptoras, al restringir la activación de la vía RAF/MEK/ERK (MAPK). Al interactuar con componentes como RAF y modular complejos de señalización dependientes de RAS, SPRED2 ayuda a controlar la proliferación y diferenciación inducidas por factores de crecimiento, así como las respuestas inflamatorias. La alteración de la expresión o la función de SPRED2 se ha asociado con programas de señalización MAPK desregulados implicados en la biología del cáncer y en procesos mediados por el sistema inmunitario, lo que respalda su utilidad como un nodo para estudiar la atenuación de señales y el control por retroalimentación. En células humanas, la perturbación de SPRED2 ofrece un enfoque manejable para analizar el crosstalk entre la señalización MAPK y las salidas transcripcionales y del citoesqueleto aguas abajo.
SPRED2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SPRED2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SPRED2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SPRED2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SPRED2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.