SPRED2 Plasmide Double Nickase (h): sc-404738-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SPRED2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SPRED2 Double Nickase Plasmid (h) e il SPRED2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SPRED2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SPRED2 Antibody (6G8): sc-517018
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SPRED2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404738-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SPRED2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404738-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SPRED2 (Sprouty related EVH1 domain containing 2) è una proteina adattatrice citosolica che funge da regolatore negativo della segnalazione delle tirosin-chinasi recettoriali, limitando l’attivazione della via RAF/MEK/ERK (MAPK). Interagendo con componenti come RAF e modulando i complessi di segnalazione dipendenti da RAS, SPRED2 contribuisce a controllare la proliferazione, la differenziazione e le risposte infiammatorie indotte dai fattori di crescita. Alterazioni dell’espressione o della funzione di SPRED2 sono state associate a programmi di segnalazione MAPK deregolati, implicati sia nella biologia del cancro sia in processi mediati dal sistema immunitario, a supporto della sua utilità come nodo per studiare l’attenuazione del segnale e il controllo tramite feedback. Nelle cellule umane, la perturbazione di SPRED2 offre un approccio pratico per analizzare il crosstalk tra la segnalazione MAPK e gli output trascrizionali e citoscheletrici a valle.
SPRED2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SPRED2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SPRED2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SPRED2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SPRED2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.