Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
SPRED2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404738
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- SPRED2 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico SPRED2, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SPRED2 Anticuerpo (6G8): sc-517018
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
SPRED2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404738 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
SPRED2 (sprouty related EVH1 domain containing 2) codifica una proteína adaptadora citosólica que regula negativamente la señalización de los receptores tirosina quinasa al inhibir la cascada Ras–Raf–MEK–ERK/MAPK. Mediante interacciones con componentes como Raf y la neurofibromina, SPRED2 ayuda a limitar la proliferación, la diferenciación y la señalización inflamatoria impulsadas por factores de crecimiento, contribuyendo al control homeostático de las respuestas celulares. La alteración de la expresión o la función de SPRED2 se ha asociado con una actividad MAPK desregulada en biología del cáncer y con procesos inmunitarios e inflamatorios, incluidos contextos que involucran señalización aberrante de citocinas y quimiocinas. Como freno de la vía, SPRED2 se estudia con frecuencia por su papel en ajustar la amplitud y la duración de la señalización aguas abajo de los RTK y de otras entradas upstream que convergen en ERK.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO SPRED2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SPRED2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SPRED2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SPRED2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SPRED2.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SPRED2 para la investigación de la señalización de SPRED2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de SPRED2 críticos para la función de SPRED2
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SPRED2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido SPRED2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SPRED2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SPRED2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SPRED2 (h) y el plásmido HDR SPRED2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SPRED2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SPRED2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.