SPPL2b Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405646
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- SPPL2b El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico SPPL2b, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
SPPL2b Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-405646 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
SPPL2B codifica SPPL2b, una proteasa aspártica intramembrana de la familia tipo peptidasa de péptido señal, que se localiza en las membranas endosomales y lisosomales. SPPL2b contribuye a la proteólisis intramembrana regulada, modulando el recambio de proteínas de membrana y la generación de fragmentos peptídicos dentro del sistema endo-lisosomal. A través de estas actividades, SPPL2b está en posición de influir en el tráfico vesicular, el procesamiento de receptores y la señalización posterior vinculada a vías inmunitarias e inflamatorias. La proteólisis intramembrana desregulada y la función endolisosomal son relevantes en estudios de neurodegeneración, homeostasis de células inmunitarias y control de calidad de proteínas de membrana.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO SPPL2b (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SPPL2B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SPPL2B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SPPL2B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SPPL2b.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SPPL2B para la investigación de la señalización de SPPL2b, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de SPPL2B críticos para la función de SPPL2b
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SPPL2B para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido SPPL2b CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SPPL2b CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SPPL2B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SPPL2b (h) y el plásmido HDR SPPL2b (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SPPL2B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SPPL2B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.