Plásmido CRISPR de Activación (h) Spo11: sc-404432-ACT

El gen humano **SPO11** codifica Spo11, una endonucleasa específica de la meiosis similar a las topoisomerasas, que cataliza roturas programadas de doble cadena de ADN para iniciar la recombinación homóloga. Al generar roturas en puntos calientes de recombinación meiótica, Spo11 favorece la sinapsis, la formación de entrecruzamientos (crossovers) y la segregación cromosómica correcta durante la gametogénesis, vinculándose así con vías que regulan la reparación del ADN, la recombinación y la estabilidad del genoma. La alteración o desregulación de la actividad de **SPO11** puede perturbar la progresión meiótica y los resultados de la recombinación, por lo que es relevante en estudios sobre infertilidad, aneuploidía y mecanismos que protegen la integridad cromosómica. **SPO11** también se utiliza como factor modelo para analizar la formación controlada de roturas de ADN y la elección de vías de reparación en estados celulares especializados.

Spo11 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SPO11 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Spo11 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SPO11 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SPO11, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Spo11. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SPO11 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Spo11 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Spo11 en células tumorales con expresión de SPO11 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.