The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
SphK2双切口酶质粒(m): sc-425246-NIC
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- SphK2 双切口酶质粒（m）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- SphK2双切酶质粒（m）和SphK2双切酶质粒（m2）编码针对Sphk2的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
SphK2双切口酶质粒(m) | sc-425246-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SphK2双切口酶质粒(m2) | sc-425246-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
小鼠 Sphk2 基因编码鞘氨醇激酶 2（SphK2），这是一种脂质激酶，可对鞘氨醇进行磷酸化生成鞘氨醇-1-磷酸（S1P）。S1P 是一种具有多效性的信号脂质，能够调控膜运输、转录程序以及应激反应。SphK2 的活性会影响神经酰胺、鞘氨醇与 S1P 之间的平衡，从而影响细胞凋亡、自噬、线粒体功能和炎症信号传导。通过调控 S1P 依赖性通路及细胞内靶点，SphK2 参与免疫细胞功能、血管生物学与代谢稳态。SphK2/S1P 信号的失调与炎症、纤维化、神经退行性变以及致癌过程等情境相关，因此可作为在疾病相关模型中开展机制研究的有用节点。
SphK2 双切酶质粒（m）由一对匹配的质粒组成，专为在 mouse 细胞系中对 Sphk2 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Sphk2内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏Sphk2的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了Sphk2基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。