Partículas Lentivirales de Activación (h) SphK1: sc-401274-LAC

SPHK1 codifica la esfingosina quinasa 1 (SphK1), una quinasa lipídica citosólica que fosforila la esfingosina para generar esfingosina-1-fosfato (S1P), un lípido de señalización bioactivo que regula la supervivencia celular, la proliferación, la motilidad y la señalización inflamatoria. Al desplazar el equilibrio ceramida/esfingosina/S1P, SphK1 integra respuestas al estrés y señales metabólicas con la remodelación de los lípidos de membrana y la señalización posterior a través de receptores de S1P y efectores intracelulares. La actividad de SPHK1 influye en vías como PI3K–AKT, MAPK/ERK, NF-κB y la dinámica del citoesqueleto, vinculando el metabolismo de los esfingolípidos con procesos asociados a la angiogénesis y la modulación inmunitaria. La expresión desregulada de SPHK1 o la señalización de S1P se ha asociado con contextos de señalización oncogénica, fibrosis y estados inflamatorios crónicos, lo que la convierte en una diana útil para estudiar la transducción de señales mediada por lípidos y las transiciones de estado celular.

Las partículas de activación lentiviral SphK1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SPHK1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral SphK1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SPHK1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de SphK1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SPHK1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.