SphK1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401274-ACT

ヒトSPHK1はスフィンゴシンキナーゼ1（SphK1）をコードしており、細胞質に存在する脂質キナーゼとしてスフィンゴシンをリン酸化し、スフィンゴシン-1-リン酸（S1P）を産生します。S1Pは、代謝状態をシグナル出力へと結び付ける生理活性スフィンゴ脂質です。SphK1はスフィンゴ脂質レオスタットをS1P側へと傾けることで、細胞内での作用およびS1P受容体依存性シグナル伝達を介して、膜輸送、カルシウム依存性シグナル、さらに下流のMAPK/ERK、PI3K/AKT、NF-κB経路の活性に影響を与えます。SPHK1の制御は、多様な細胞環境において炎症応答、ストレス適応、血管新生シグナル、細胞運動プログラムと関連付けられてきました。SPHK1/S1Pシグナルの異常は、スフィンゴ脂質リモデリングが増殖・生存・微小環境とのコミュニケーションに影響するがん生物学、線維化、免疫介在性疾患のモデルで、しばしば研究対象となっています。

SphK1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SPHK1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SphK1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SPHK1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSPHK1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SphK1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSPHK1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSphK1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSPHK1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSphK1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。