Plásmido Doble Nickase (h) spectrin β II: sc-401818-NIC

SPTBN1 codifica la espectrina βII humana, un componente central del citoesqueleto de espectrina–actina asociado a la membrana, que sostiene la estabilidad de la membrana plasmática y organiza la arquitectura cortical. La espectrina βII contribuye a la forma celular, la resiliencia mecánica y el tráfico intracelular al actuar como andamiaje para canales iónicos, receptores y complejos de señalización en dominios especializados de la membrana. Mediante interacciones con anquirinas y actina, ayuda a coordinar la remodelación del citoesqueleto, el transporte vesicular y la polaridad celular durante el desarrollo y en tejidos diferenciados. La alteración de la función de SPTBN1 se ha vinculado a fenotipos del neurodesarrollo y a disfunción del citoesqueleto, lo que lo convierte en una diana útil para estudiar mecanismos que conectan el andamiaje de membrana con la señalización neuronal y la homeostasis celular.

spectrin β II El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SPTBN1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SPTBN1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SPTBN1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SPTBN1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.