spectrin α I Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403563

Descripción general

SPTA1 codifica la espectrina α I humana, un componente central del citoesqueleto de la membrana del eritrocito que forma heterodímeros con la β-espectrina para ensamblar una red reticular que sostiene la estabilidad y la deformabilidad de la membrana. Esta red citosquelética conecta proteínas integrales de membrana con el complejo de unión basado en actina, coordinando la resistencia mecánica durante ciclos repetidos de esfuerzo cortante en la circulación. La alteración de la arquitectura de la espectrina perturba el mantenimiento de la forma del glóbulo rojo y la integridad de la membrana, influyendo en procesos como el tráfico de membrana, la remodelación del citoesqueleto y la homeostasis iónica. La variación genética o la deficiencia en SPTA1 se asocia con trastornos hereditarios de la membrana de los glóbulos rojos, como la esferocitosis y la eliptocitosis hereditarias, lo que lo convierte en un objetivo relevante para estudiar relaciones genotipo–fenotipo en la biología eritroide.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO spectrin α I (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SPTA1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SPTA1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SPTA1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína spectrin α I.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SPTA1 para la investigación de la señalización de spectrin α I, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SPTA1 críticos para la función de spectrin α I
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SPTA1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido spectrin α I CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido spectrin α I CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SPTA1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR spectrin α I (h) y el plásmido HDR spectrin α I (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SPTA1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SPTA1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.