Plásmido Doble Nickase (m) SPARC: sc-423101-NIC

Sparc codifica SPARC (proteína secretada ácida y rica en cisteína), una glucoproteína matricelular que modula el ensamblaje de la matriz extracelular (MEC) y las interacciones célula–matriz, en lugar de actuar como un componente estructural de la MEC. En tejidos de ratón, SPARC influye en la fibrilogénesis del colágeno, la dinámica de las adhesiones focales y la biodisponibilidad de factores de crecimiento, integrándose con vías que regulan la migración celular, la proliferación y la remodelación tisular. La actividad de SPARC se vincula con frecuencia a la reparación de heridas, a contextos de señalización angiogénica y a programas de remodelación fibrótica mediante efectos sobre la organización del estroma y la rigidez de la matriz. La expresión alterada de SPARC se ha asociado con cambios en el comportamiento del microambiente tumoral, la remodelación inflamatoria y fenotipos de fibrosis orgánica en modelos experimentales, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar mecanismos patológicos impulsados por la MEC.

SPARC El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Sparc en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Sparc. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Sparc. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Sparc alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.