Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SPA-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406755
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- SPA-1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico SPA-1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SPA-1 Anticuerpo (B-7): sc-166219
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
SPA-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406755 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
SIPA1 codifica SPA-1, una proteína activadora de GTPasa (GAP) de Rap1 que acelera la hidrólisis de GTP para limitar la señalización de Rap1 y ajustar la adhesión mediada por integrinas, la dinámica del citoesqueleto y la migración celular. Al modular la señalización “inside-out” dependiente de Rap1, SPA-1 influye en el tráfico de células inmunitarias, la estabilidad de las uniones célula–célula y las respuestas a señales extracelulares. La alteración de la expresión o la actividad de SIPA1 se ha relacionado con programas desregulados de proliferación y motilidad relevantes para la progresión tumoral y el potencial metastásico. Esta biología convierte a SIPA1 en un nodo útil para estudiar redes de pequeñas GTPasas, la señalización dependiente de la adhesión y los comportamientos celulares impulsados por el microambiente.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO SPA-1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SIPA1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SIPA1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SIPA1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SPA-1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SIPA1 para la investigación de la señalización de SPA-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de SIPA1 críticos para la función de SPA-1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SIPA1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido SPA-1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SPA-1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SIPA1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SPA-1 (h) y el plásmido HDR SPA-1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SIPA1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SIPA1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.