SP140 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-436685

Descripción general

SP140 codifica una proteína nuclear con un patrón punteado (“speckled”) que actúa como lectora epigenética y reguladora de la transcripción en células inmunitarias, con funciones vinculadas a la organización de la cromatina y al control de programas génicos inflamatorios. En el ratón, SP140 está enriquecida en linajes hematopoyéticos y se ha asociado con la modulación de la señalización inmunitaria innata y adaptativa, incluidas vías que influyen en las respuestas a citocinas y en redes transcripcionales impulsadas por antígenos. A través de sus dominios de unión a la cromatina, SP140 puede moldear estados de expresión génica relevantes para la diferenciación y activación de macrófagos y linfocitos. La actividad desregulada de SP140 se ha relacionado con patología mediada por el sistema inmunitario y con fenotipos de respuesta del hospedador, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar mecanismos inflamatorios y el control transcripcional.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SP140 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sp140 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sp140 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sp140 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SP140.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sp140 para la investigación de la señalización de SP140, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sp140 críticos para la función de SP140
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sp140 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SP140 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SP140 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sp140. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SP140 (m) y el plásmido HDR SP140 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sp140 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sp140 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.