Plasmide CRISPR d'Activation (m) SP140: sc-436685-ACT

Le gène murin Sp140 code SP140, un « lecteur » nucléaire de la chromatine enrichi dans les lignages immunitaires, qui contribue à façonner les programmes transcriptionnels au cours des réponses immunitaires innée et adaptative. SP140 contient des modules épigénétiques de type « lecteur » qui interagissent avec des histones modifiées afin d’influencer l’accessibilité de la chromatine, ce qui le relie à des voies contrôlant la signalisation des cytokines, l’expression des gènes stimulés par l’interféron et la répression/activation de gènes inflammatoires. En modulant la transcription au niveau de loci pertinents pour l’immunité, SP140 sert à étudier la différenciation des macrophages et des cellules B, les réponses antimicrobiennes et la régulation épigénétique des réseaux inflammatoires. Une activité altérée de SP140 a été associée à une dérégulation de l’homéostasie immunitaire et à la biologie des maladies inflammatoires, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques d’immunogénétique et de contrôle des gènes piloté par la chromatine.

SP140 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Sp140 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SP140 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Sp140 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Sp140, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SP140. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Sp140 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SP140 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SP140 dans les cellules tumorales présentant une expression de Sp140 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.