Sp1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-423094-ACT

Mouse Sp1 (Specificity Protein 1) ist ein ubiquitär exprimierter Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der an GC-reiche Promotorelemente bindet und so die basale und induzierbare Genexpression reguliert. Sp1 integriert Signale aus den MAPK/ERK-, PI3K/AKT- und oxidativen Stress-Signalwegen, um Transkriptionsprogramme zu koordinieren, die Zellzyklusprogression, Chromatinzugänglichkeit, DNA-Schadensantworten und Apoptose steuern. Durch seine breite Promotorbelegung und Interaktionen mit Koaktivatoren und Korepressoren beeinflusst Sp1 Prozesse wie Differenzierung und metabolische Anpassung. Eine fehlregulierte Sp1-Aktivität wurde mit veränderter inflammatorischer Signalübertragung, fibroseassoziierter Genexpression und onkogenen Transkriptionsnetzwerken in Verbindung gebracht, was Sp1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien der Transkriptionskontrolle in krankheitsrelevanten Kontexten macht.

Sp1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Sp1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Sp1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Sp1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Sp1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Sp1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Sp1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Sp1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Sp1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Sp1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.