SP-lyase Lentiviral Activation Particles (m): sc-422908-LAC

Das murine Gen **Sgpl1** kodiert die **Sphingosin-1-phosphat-Lyase** (SP-Lyase), ein mit dem endoplasmatischen Retikulum assoziiertes Enzym, das **Sphingosin-1-phosphat (S1P)** irreversibel zu **Phosphoethanolamin** und **Hexadecenal** spaltet. Dadurch wird die S1P-Signalübertragung beendet und die intrazelluläre **Sphingolipid-Homöostase** reguliert. Indem die SP-Lyase das Gleichgewicht zwischen den Pools von S1P, Sphingosin und Ceramid steuert, beeinflusst sie Signalwege, die Zellüberleben, Stressantworten und lipidvermittelte Signalgebung regulieren, einschließlich Prozessen, die mit der Migration von Immunzellen und der Gefäßbiologie verknüpft sind. Eine veränderte SGPL1-Aktivität wurde mit gestörtem Sphingolipidstoffwechsel und Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Entzündung, Nieren- und Nebennierenfunktionsstörungen sowie neuroentwicklungsbedingte Auffälligkeiten relevant sind. Damit stellt **Sgpl1** einen nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien in metabolischen und Signalnetzwerken dar.

SP-lyase Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Sgpl1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

SP-lyase Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Sgpl1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen SP-lyase-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Sgpl1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.