Plásmido CRISPR de Activación (h) Sox9: sc-400143-ACT

SOX9 codifica el factor de transcripción Sox9, una proteína de unión al ADN del grupo de alta movilidad (HMG) que regula la especificación de linaje y los programas de diferenciación, incluida la condrogénesis y el desarrollo de múltiples tejidos epiteliales. Sox9 integra señales de vías como TGF-β/BMP, WNT/β-catenina, Hedgehog y Notch para controlar la actividad de potenciadores (enhancers) y la accesibilidad de la cromatina durante las decisiones de destino celular. En la biología humana, la expresión desregulada de SOX9 se asocia con trastornos del desarrollo y se implica con frecuencia en redes transcripcionales asociadas al cáncer, donde una actividad alterada de Sox9 puede influir en la proliferación, los estados tipo célula madre y la plasticidad epitelio-mesenquimal. Como regulador dependiente del contexto, SOX9 se estudia ampliamente en modelos de desarrollo de órganos, diferenciación de células madre y mecanismos de control transcripcional en estados celulares relevantes para la enfermedad.

Sox9 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SOX9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Sox9 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SOX9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SOX9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Sox9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SOX9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Sox9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Sox9 en células tumorales con expresión de SOX9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.