Plásmido Doble Nickase (m2) Sox2: sc-423086-NIC-2

El gen Sox2 del ratón codifica el factor de transcripción SOX2 (SRY-box), un regulador central de la pluripotencia y la autorrenovación que coopera con OCT4 y NANOG para mantener la identidad de las células madre embrionarias y, al mismo tiempo, frenar el compromiso prematuro hacia linajes diferenciados. SOX2 se une a elementos potenciadores y promotores para controlar programas transcripcionales que gobiernan la especificación del neuroectodermo, el mantenimiento de células madre/progenitoras neurales y las transiciones en el estado de la cromatina, integrando señales como WNT, FGF, BMP y SHH que moldean el patrón del desarrollo. La expresión o dosis desregulada de Sox2 se asocia con defectos en la embriogénesis temprana y el neurodesarrollo, y las redes reguladoras alteradas de SOX2 se estudian con frecuencia en el contexto de estados similares a células madre en biología del cáncer. La edición genética de Sox2 en ratón permite investigar de manera mecanística la circuitería transcripcional, la función de potenciadores, las decisiones de destino celular y los flujos de trabajo de reprogramación en sistemas de desarrollo y modelos de enfermedad.

Sox2 El plásmido de doble nicasa (m2) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Sox2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Sox2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Sox2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Sox2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.