Sox-18 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402913-ACT

SOX18 codifica a Sox-18, um fator de transcrição do tipo HMG-box que se liga ao DNA e coopera com outros membros da família SOX para regular programas gênicos que controlam o desenvolvimento vascular e linfático, a especificação endotelial e a morfogênese tecidual. Sox-18 influencia redes transcricionais relacionadas à integridade das junções endoteliais, ao brotamento e ao remodelamento de vasos, interagindo com eixos de sinalização como respostas angiogênicas mediadas por VEGF e circuitos transcricionais do desenvolvimento. Alterações na atividade de SOX18 têm sido associadas a um padrão vascular/linfático desregulado e à angiogênese associada a tumores, tornando-o relevante para estudar a plasticidade das células endoteliais e a regulação pelo microambiente. Em modelos celulares humanos, a modulação da expressão de Sox-18 é comumente usada para investigar decisões de linhagem, função de barreira e redes regulatórias de genes vasculares.

Sox-18 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SOX18 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sox-18 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SOX18 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SOX18, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sox-18. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SOX18 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sox-18 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sox-18 em células tumorais com expressão de SOX18 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.