SOCS-6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402344-ACT

O SOCS6 humano (supressor da sinalização de citocinas 6) codifica a proteína SOCS-6, um adaptador contendo domínio SH2 e componente de ligase E3 de ubiquitina que atenua a sinalização de receptores tirosina-quinase e de receptores de citocinas. Por meio de sua SOCS box, a SOCS-6 pode acoplar complexos de sinalização ativados à maquinaria de ubiquitinação elongina B/C–culina, influenciando o turnover proteico e a dinâmica a jusante das vias MAPK/ERK, PI3K–AKT e JAK/STAT. A atividade de SOCS6 contribui para a regulação da proliferação, sobrevivência e diferenciação celulares ao modular o controle por feedback da sinalização induzida por fatores de crescimento. A expressão ou função desregulada de SOCS6 tem sido associada a alterações na sinalização oncogênica e em redes supressoras de tumor em múltiplos contextos de câncer, o que sustenta seu valor em estudos mecanísticos de vias de sinalização.

SOCS-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SOCS6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SOCS-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SOCS6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SOCS6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SOCS-6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SOCS6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SOCS-6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SOCS-6 em células tumorais com expressão de SOCS6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.