Plasmide CRISPR d'Activation (h) SOCS-6: sc-402344-ACT

Le gène humain **SOCS6** (suppressor of cytokine signaling 6) code la protéine **SOCS-6**, un adaptateur contenant un domaine SH2 et un composant de ligase E3 de l’ubiquitine, qui atténue la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase et des récepteurs de cytokines. Via sa **SOCS box**, SOCS-6 peut coupler des complexes de signalisation activés à la machinerie d’ubiquitination **elongine B/C–culline**, influençant ainsi le renouvellement des protéines et la dynamique en aval des voies **MAPK/ERK**, **PI3K–AKT** et **JAK/STAT**. L’activité de SOCS6 contribue à la régulation de la prolifération, de la survie et de la différenciation cellulaires en façonnant le contrôle par rétroaction de la signalisation induite par les facteurs de croissance. Une expression ou une fonction dérégulée de SOCS6 a été associée à des altérations de la signalisation oncogénique et des réseaux suppresseurs de tumeurs dans divers contextes cancéreux, ce qui soutient son intérêt pour des études mécanistiques des voies de signalisation.

SOCS-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SOCS6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SOCS-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SOCS6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SOCS6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SOCS-6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SOCS6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SOCS-6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SOCS-6 dans les cellules tumorales présentant une expression de SOCS6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.