Partículas Lentivirales de Activación (h) SOAT1: sc-417623-LAC

SOAT1 (esterol O-aciltransferasa 1; ACAT1) es una enzima de membrana del retículo endoplásmico que esterifica el colesterol libre con acil-CoA de ácidos grasos de cadena larga para generar ésteres de colesterilo destinados al almacenamiento en gotas lipídicas. Al controlar el equilibrio entre el colesterol no esterificado y los ésteres de colesterilo almacenados, SOAT1 ayuda a regular la composición de la membrana, la homeostasis de esteroles y el manejo de lípidos asociados a lipoproteínas. La actividad de SOAT1 se relaciona con el tráfico de colesterol, la biología de las células espumosas y programas más amplios del metabolismo lipídico que influyen en el estrés oxidativo y la señalización inflamatoria. La acumulación desregulada de ésteres de colesterilo y la expresión alterada de SOAT1 se han vinculado con la biología de las lesiones ateroscleróticas y también se han estudiado en el contexto de la remodelación lipídica tumoral y del desequilibrio de colesterol asociado a enfermedades neurodegenerativas.

Las partículas de activación lentiviral SOAT1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SOAT1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral SOAT1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SOAT1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de SOAT1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SOAT1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.