Plásmido CRISPR de Activación (h) SOAT1: sc-417623-ACT

SOAT1 (esterol O-aciltransferasa 1; ACAT1) es una enzima de membrana del retículo endoplásmico que cataliza la esterificación del colesterol libre a ésteres de colesterilo, lo que favorece la biogénesis de gotículas lipídicas y la homeostasis del colesterol celular. Al amortiguar el exceso de esteroles, SOAT1 influye en la composición de la membrana, el metabolismo de las lipoproteínas y las vías de señalización sensibles a esteroles, incluidos los programas lipídicos regulados por SREBP y las respuestas inflamatorias en macrófagos. La actividad alterada de SOAT1 se ha asociado con la formación de células espumosas, la desregulación lipídica en enfermedades neurodegenerativas y la reprogramación metabólica observada en múltiples contextos tumorales, donde la acumulación de ésteres de colesterilo puede correlacionarse con la proliferación y la adaptación al estrés. Estas características biológicas hacen de SOAT1 una diana útil para estudiar el tráfico de esteroles, el almacenamiento de lípidos y los fenotipos impulsados por colesterol en modelos celulares humanos relevantes.

SOAT1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SOAT1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SOAT1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SOAT1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SOAT1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SOAT1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SOAT1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SOAT1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SOAT1 en células tumorales con expresión de SOAT1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.