SNAT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-430613

Übersicht

Slc38a1 kodiert den natriumgekoppelten Transporter für neutrale Aminosäuren 1 (SNAT1), einen Transporter des System A, der die Na⁺-abhängige Aufnahme kleiner neutraler Aminosäuren wie Glutamin, Alanin und Serin über die Plasmamembran vermittelt. Durch die Regulation der intrazellulären Verfügbarkeit von Aminosäuren trägt SNAT1 zur zellulären Stickstoffbilanz, zur Redox-Homöostase und zu metabolischen Signalprogrammen bei, einschließlich der aminosäuresensitiven Regulation von mTORC1. In Mausgeweben ist die SNAT1-Aktivität besonders für den Aminosäurehaushalt in Neuronen und Gliazellen relevant, der den Neurotransmitterkreislauf und den bioenergetischen Bedarf unterstützt. Eine veränderte Aufnahme neutraler Aminosäuren wurde mit metabolischen Stressantworten und neurobiologiebezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch Slc38a1 ein nützliches Ziel für die Untersuchung von Nährstofftransport und Signalweg-Crosstalk ist.

Das SNAT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Slc38a1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Slc38a1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Slc38a1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SNAT1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Slc38a1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SNAT1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Slc38a1-Exone abzielen, die für die SNAT1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Slc38a1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SNAT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SNAT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Slc38a1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SNAT1 HDR-Plasmid (m) und SNAT1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Slc38a1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Slc38a1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.