Plásmido CRISPR de Activación (h) SNAP 25: sc-401138-ACT

El gen humano **SNAP25** codifica la proteína asociada al sinaptosoma 25, una t‑SNARE central que se ensambla con la sintaxina y VAMP/sinaptobrevina para impulsar el acoplamiento de vesículas sinápticas y la fusión de membranas desencadenada por Ca²⁺. La actividad de SNAP25 es clave para la exocitosis regulada, ya que modula la probabilidad de liberación de neurotransmisores, la plasticidad a corto plazo y el reciclaje presináptico de vesículas dentro de la vía de tráfico vesicular mediada por SNARE. Al acoplar la fusión vesicular a la señalización del calcio y a la organización del citoesqueleto presináptico, SNAP25 influye en la excitabilidad de las redes neuronales y en la maduración de los circuitos. Alteraciones en la expresión o la función de SNAP25 se han vinculado, en estudios genéticos y funcionales, con fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, lo que la convierte en un nodo útil para investigar mecanismos de disfunción sináptica.

SNAP 25 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SNAP25 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SNAP 25 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SNAP25 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SNAP25, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SNAP 25. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SNAP25 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SNAP 25 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SNAP 25 en células tumorales con expresión de SNAP25 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.