SNAP 23 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417781-ACT

SNAP23は、シンタキシンおよびVAMPファミリーのメンバーと対を成して、調節性および構成的エキソサイトーシスに必要な膜融合反応を触媒するQbc-SNAREである、シナプトソーム関連タンパク質23をコードします。SNAP23は形質膜における小胞のドッキングと輸送を支え、分泌、エンドサイトーシス後のリサイクリング、ならびにインスリン応答細胞におけるGLUT4の膜移行に影響します。顆粒および小胞の融合制御を通じて、免疫細胞の脱顆粒やサイトカイン放出にも寄与し、その機能異常は、炎症シグナルの変化や、糖尿病・肥満研究に関連する代謝表現型と関連づけられています。さらにSNAP23は、膜動態や細胞表面受容体の利用可能性を制御する経路とも相互作用し、多様なヒト細胞型において、小胞輸送とシグナル出力とを結び付けています。

SNAP 23 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SNAP23の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SNAP 23 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SNAP23 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSNAP23転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SNAP 23の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSNAP23遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSNAP 23依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSNAP23発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSNAP 23経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。