Plásmido CRISPR de Activación (h) SNAI 1: sc-400244-ACT

SNAI1 codifica SNAI1 (Snail), un represor transcripcional con dedos de zinc que coordina la transición epitelio–mesénquima (EMT) al suprimir directamente programas génicos epiteliales, incluido CDH1, y promover fenotipos mesenquimales. A través de interacciones con redes de señalización de TGF-β, Wnt/β-catenina, Notch y señales inflamatorias, SNAI1 regula la adhesión celular, la polaridad, la motilidad y la plasticidad de linaje durante el desarrollo y la remodelación tisular. La actividad desregulada de SNAI1 se vincula con frecuencia a fenotipos de progresión tumoral como la invasión, la diseminación metastásica, estados similares a células madre y resistencia a terapias, y también contribuye a programas transcripcionales asociados a la fibrosis. Estas características hacen de SNAI1 un nodo central para estudiar el control transcripcional de la EMT, la remodelación de la cromatina y las transiciones de estado celular impulsadas por el microambiente.

SNAI 1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SNAI1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SNAI 1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SNAI1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SNAI1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SNAI 1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SNAI1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SNAI 1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SNAI 1 en células tumorales con expresión de SNAI1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.