Plasmide CRISPR d'Activation (h) SMYD2: sc-403129-ACT

SMYD2 code une lysine méthyltransférase contenant des domaines SET et MYND, qui module l’état de la chromatine et la fonction des protéines par mono‑ et diméthylation de substrats histoniques et non histoniques. En influençant les programmes transcriptionnels, les réponses aux dommages de l’ADN et le contrôle du cycle cellulaire, SMYD2 intègre la régulation épigénétique à des voies de signalisation qui façonnent la prolifération et l’adaptation au stress cellulaire. Parmi les substrats rapportés figurent des régulateurs de la stabilité du génome et de la signalisation des points de contrôle, reliant l’activité de SMYD2 à des réseaux oncogéniques et à des états de différenciation altérés observés dans de multiples contextes tumoraux. Par conséquent, SMYD2 est largement étudiée comme un nœud reliant le remodelage de la chromatine, le contrôle transcriptionnel et la méthylation du protéome dans une biologie pertinente pour les maladies.

SMYD2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SMYD2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SMYD2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SMYD2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SMYD2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SMYD2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SMYD2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SMYD2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SMYD2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SMYD2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.